一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法[CN201810192797.8] - 湖南农业大学

专利申请

2018-03-08
公布公告

2018-08-17
授权日期

2021-08-27
终止

2028-08-14

一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法

* 专利信息仅供参考，不具有法律效力。有效专利

注册号： CN201810192797.8 申请日期： 2018-03-08 专利主类别： C12N15/85 {{ classMap["C12N15/85"] }}

申请人名称：湖南农业大学

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申请人地址：湖南省长沙市芙蓉区农大路1号

专利分类项目

C12N15/85 : 用于动物细胞

C12N15/90 : 将外来DNA稳定地引入染色体中

C12N5/10 : 经引入外来遗传物质而修饰的细胞，如病毒转化的细胞

专利注册信息

初审公告期号	2018-03-08	初审公告日期	2018-08-17
注册公告期号	2021-08-27	注册公告日期	2021-08-27
专用权期限	2018-08-17 - 2028-08-14	专利类型	发明公开
代理组织机构	长沙正奇专利事务所有限责任公司查看该机构代理的所有专利

专利介绍

一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)-2A-Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR-gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。

法律进度